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組分 規(guī)格 | 20T | 100T | 500T | 1000T | 開封后保存溫度 | 穩(wěn)定性 |
A.10 mM EdU | 40 μL | 0.2 mL | 1 mL | 2×1mL | -20℃ | 開封后按指定溫度保存可有效放置一年 |
B.YF? 488/555/594/647A Azide | 4 μL | 20 μL | 100 μL | 200 μL | -20℃，避光 | |
C.10× Click-iT EdU反應(yīng)緩沖液 | 200 μL | 1 mL | 5 mL | 10 mL | 2-8℃ | |
D.CuSO4 | 100 μL | 0.5 mL | 2×1.25 mL | 5 mL | 2-8℃ | |
E.Click-iT EdU緩沖液添加物 | 6 mg | 30 mg | 150 mg | 2 × 150 mg | 2-8℃ | |
F.Hoechst 33342 | 5 μL | 25 μL | 125 μL | 250 μL | 2-8℃ |
規(guī)格：上述反應(yīng)次數(shù)針對96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞，不同容器的具體用量可參考附表1。
熒光光譜數(shù)據(jù)：YF? 488 Azide：495/519 nm；YF? 555 Azide：555/565 nm；YF?594 Azide：590/617 nm
YF? 647A Azide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm（bound to DNA）
產(chǎn)品介紹細(xì)胞增殖檢測是評估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實(shí)驗手段。檢測細(xì)胞增殖最精確的方法是BrdU 法。EdU 法檢測試劑盒是 BrdU 法的革命性突破。EdU （5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）是一種嘧啶類似物，在 DNA 合成期整合入 DNA 雙鏈。EdU 法檢測基于“點(diǎn)擊”反應(yīng)，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴作用發(fā)生共價反應(yīng)，形成共價鍵。本試劑盒中，EdU 含有炔烴，YF?488/555/647A Azide 染料含有疊氮化合物。點(diǎn)擊法的 EdU 標(biāo)記增殖快速有效，易于使用。BrdU 方法需要 DNA 變性（如酸變性、熱變性或者 用 DNase 消化）暴露出 BrdU，從而方便 BrdU 抗體結(jié)合；而 EdU 法只需標(biāo)準(zhǔn)化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促滲就可以使檢測試劑進(jìn)入細(xì)胞，只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的 EdU。本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組分，可以用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的增殖檢測。
UE-C6018S/C6018M/C6018L/C6018XL◆YF?488/555/594/647有什么區(qū)別？
主要就是檢測EDU的物質(zhì)帶的熒光基團(tuán)不同，檢測時發(fā)射熒光的顏色不同。實(shí)驗效果相同，可根據(jù)偏好或需求進(jìn)行選擇。◆EdU試劑盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？清洗步驟中，BSA可以終止掉未反應(yīng)的甲醛。◆能否在活細(xì)胞中進(jìn)行Click-iT EdU檢測？不可以。雖然EdU是對活細(xì)胞進(jìn)行代謝標(biāo)記，但是疊氮化物檢測試劑和緩沖液組分是細(xì)胞非透過型，檢測信號時的Click反應(yīng)必須在固定和通透的樣品上進(jìn)行。◆質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表達(dá)的熒光蛋白檢測與Click反應(yīng)兼容嗎？檢測順序是什么？本產(chǎn)品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，故染色后無法直接檢測GFP，建議使用GFP抗體間接檢測。◆觀測到較高的本底干擾，這是什么原因所致？如何減少本底干擾？疊氮化物和炔烴類間Click反應(yīng)非常有選擇性，生物體內(nèi)幾乎不可能有副反應(yīng)發(fā)生，所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA洗滌的次數(shù)。同時，也可在同樣的檢測條件下設(shè)置一組同等處理的無染料或無Click反應(yīng)對照，以排除自發(fā)熒光干擾。此外，您還可在無EdU 體系中進(jìn)行完整的Click反應(yīng)，驗證Click反應(yīng)信號的特異性。◆為什么標(biāo)記樣品無信號或特異性信號非常低？如何提高信號？1.請保證試劑使用時為無色的狀態(tài)，不要使用已經(jīng)變黃的添加劑或緩沖液；2.為確保Click反應(yīng)試劑能夠到達(dá)核內(nèi)，細(xì)胞需要充分地固定和通透；3.由于銅離子能結(jié)合到部分試劑上，這會導(dǎo)致催化Click反應(yīng)的有效濃度降低。所以在Click反應(yīng)前，不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑（例如EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等），對某些含有這些物質(zhì)的實(shí)驗樣品來說，進(jìn)行Click反應(yīng)前，可能需要增加額外的洗滌步驟；4.當(dāng)銅離子在合適的化合價時，Click反應(yīng)才有效。Click反應(yīng)中用到的銅離子為二價銅(Cu2+)。5.延長Click反應(yīng)的時間至超過30分鐘也并不會提高信號。建議使用新鮮的Click反應(yīng)試劑再次進(jìn)行30分鐘的孵育，可更有效地提高標(biāo)記效率。◆如何對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染？試劑盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反應(yīng)后用于細(xì)胞核的染色，也可選擇使用DAPI。◆可以用于檢測植物細(xì)胞核內(nèi)的DNA復(fù)制嗎?可以。EdU是小分子，可以穿透植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。
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