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螞蟻淘/YF<sup>?</sup>647A Click-iT EdU 成像試劑盒（遠(yuǎn)紅熒光）/100T/C6018M
  • 螞蟻淘/YF<sup>?</sup>647A Click-iT EdU 成像試劑盒（遠(yuǎn)紅熒光）/100T/C6018M

螞蟻淘/YF?647A Click-iT EdU 成像試劑盒（遠(yuǎn)紅熒光）/100T/C6018M

價(jià)格: ￥811.00 市場(chǎng)價(jià): 1351.67
貨號(hào): C6018M
品牌: ebiomall
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  • 使用說(shuō)明
  • 常見(jiàn)問(wèn)題
    • 產(chǎn)品概述：儲(chǔ)存條件-20℃ 避光保存，有效期見(jiàn)外包裝。開(kāi)封后，保存溫度詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

      組分

      規(guī)格

      20T

      100T

      500T

      1000T

      開(kāi)封后保存溫度

      穩(wěn)定性

      A.10 mM EdU

      40 μL

      0.2 mL

      1 mL

      2×1mL

      -20℃

      開(kāi)封后按指定溫度保存可有效放置一年

      B.YF? 488/555/594/647A Azide

      4 μL

      20 μL

      100 μL

      200 μL

      -20℃，避光

      C.10× Click-iT EdU反應(yīng)緩沖液

      200 μL

      1 mL

      5 mL

      10 mL

      2-8℃

      D.CuSO4

      100 μL

      0.5 mL

      2×1.25 mL

      5 mL

      2-8℃

      E.Click-iT EdU緩沖液添加物

      6 mg

      30 mg

      150 mg

      2 × 150 mg

      2-8℃

      F.Hoechst 33342

      5 μL

      25 μL

      125 μL

      250 μL

      2-8℃

      規(guī)格：上述反應(yīng)次數(shù)針對(duì)96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞，不同容器的具體用量可參考附表1。

      熒光光譜數(shù)據(jù)：YF? 488 Azide：495/519 nm；YF? 555 Azide：555/565 nm；YF?594 Azide：590/617 nm

      YF? 647A Azide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm（bound to DNA）

      產(chǎn)品介紹細(xì)胞增殖檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)手段。檢測(cè)細(xì)胞增殖最精確的方法是BrdU 法。EdU 法檢測(cè)試劑盒是 BrdU 法的革命性突破。EdU （5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）是一種嘧啶類似物，在 DNA 合成期整合入 DNA 雙鏈。EdU 法檢測(cè)基于“點(diǎn)擊”反應(yīng)，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴作用發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成共價(jià)鍵。本試劑盒中，EdU 含有炔烴，YF?488/555/647A Azide 染料含有疊氮化合物。點(diǎn)擊法的 EdU 標(biāo)記增殖快速有效，易于使用。BrdU 方法需要 DNA 變性（如酸變性、熱變性或者 用 DNase 消化）暴露出 BrdU，從而方便 BrdU 抗體結(jié)合；而 EdU 法只需標(biāo)準(zhǔn)化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促滲就可以使檢測(cè)試劑進(jìn)入細(xì)胞，只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的 EdU。本試劑盒包含EdU法檢測(cè)所需要的所有組分，可以用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的增殖檢測(cè)。
      說(shuō)明書(shū)：UE-C6018S/C6018M/C6018L/C6018XL
      常見(jiàn)問(wèn)題解答：

      ◆YF?488/555/594/647有什么區(qū)別？

      主要就是檢測(cè)EDU的物質(zhì)帶的熒光基團(tuán)不同，檢測(cè)時(shí)發(fā)射熒光的顏色不同。實(shí)驗(yàn)效果相同，可根據(jù)偏好或需求進(jìn)行選擇。◆EdU試劑盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？清洗步驟中，BSA可以終止掉未反應(yīng)的甲醛。◆能否在活細(xì)胞中進(jìn)行Click-iT EdU檢測(cè)？不可以。雖然EdU是對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行代謝標(biāo)記，但是疊氮化物檢測(cè)試劑和緩沖液組分是細(xì)胞非透過(guò)型，檢測(cè)信號(hào)時(shí)的Click反應(yīng)必須在固定和通透的樣品上進(jìn)行。◆質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表達(dá)的熒光蛋白檢測(cè)與Click反應(yīng)兼容嗎？檢測(cè)順序是什么？本產(chǎn)品會(huì)影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，故染色后無(wú)法直接檢測(cè)GFP，建議使用GFP抗體間接檢測(cè)。◆觀測(cè)到較高的本底干擾，這是什么原因所致？如何減少本底干擾？疊氮化物和炔烴類間Click反應(yīng)非常有選擇性，生物體內(nèi)幾乎不可能有副反應(yīng)發(fā)生，所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA洗滌的次數(shù)。同時(shí)，也可在同樣的檢測(cè)條件下設(shè)置一組同等處理的無(wú)染料或無(wú)Click反應(yīng)對(duì)照，以排除自發(fā)熒光干擾。此外，您還可在無(wú)EdU 體系中進(jìn)行完整的Click反應(yīng)，驗(yàn)證Click反應(yīng)信號(hào)的特異性。◆為什么標(biāo)記樣品無(wú)信號(hào)或特異性信號(hào)非常低？如何提高信號(hào)？1.請(qǐng)保證試劑使用時(shí)為無(wú)色的狀態(tài)，不要使用已經(jīng)變黃的添加劑或緩沖液；2.為確保Click反應(yīng)試劑能夠到達(dá)核內(nèi)，細(xì)胞需要充分地固定和通透；3.由于銅離子能結(jié)合到部分試劑上，這會(huì)導(dǎo)致催化Click反應(yīng)的有效濃度降低。所以在Click反應(yīng)前，不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑（例如EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等），對(duì)某些含有這些物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)說(shuō)，進(jìn)行Click反應(yīng)前，可能需要增加額外的洗滌步驟；4.當(dāng)銅離子在合適的化合價(jià)時(shí)，Click反應(yīng)才有效。Click反應(yīng)中用到的銅離子為二價(jià)銅(Cu2+)。5.延長(zhǎng)Click反應(yīng)的時(shí)間至超過(guò)30分鐘也并不會(huì)提高信號(hào)。建議使用新鮮的Click反應(yīng)試劑再次進(jìn)行30分鐘的孵育，可更有效地提高標(biāo)記效率。◆如何對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染？試劑盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反應(yīng)后用于細(xì)胞核的染色，也可選擇使用DAPI。◆可以用于檢測(cè)植物細(xì)胞核內(nèi)的DNA復(fù)制嗎?可以。EdU是小分子，可以穿透植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。
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