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NEB/OneTaq? RT-PCR Kit/E5310S/30 reactions
  • NEB/OneTaq? RT-PCR Kit/E5310S/30 reactions

NEB/OneTaq? RT-PCR Kit/E5310S/30 reactions

價格: ￥1680.00 市場價: 2800.00
品牌: NEB
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    • Description:

      OneTaq?RT-PCRKitcombinestwopowerfulmixes,M-MuLVEnzymeMixandOneTaqHotStart2XMasterMixwithStandardBufferfor2-stepRT-PCRapplications.ThetwomixesrequireminimalhandlingduringreactionsetupandyetofferconsistentandrobustRT-PCRreactions.

      ThefirststrandCDNAsynthesisisachievedbyusingtwooptimizedmixes,M-MuLVEnzymeMixandM-MuLVReactionMix.M-MuLVEnzymeMixcombinesM-MuLVReverseTranscriptaseandmurineRNaseInhibitorwhileM-MuLVReactionMixcontainsdNTPsandanoptimizedbuffer.Thekitalsocontainstwooptimizedprimersforreversetranscriptionandnuclease-freewater.Ananchoredoligo-dTprimer[d(T)23VN]forcestheprimertoannealtothebeginningofthepolyAtail.TheoptimizedRandomPrimerMixprovidesrandomandconsistentprimingsitescoveringtheentireRNAtemplatesincludingbothmRNAsandnon-polyadenylatedRNAs.

      TheamplificationstepfeaturesaOneTaqHotStartDNAPolymeraseinamastermixformat.OneTaqHotStartDNAPolymeraseoffershigherfidelitythanTaqandbetteramplification.RT-PCRproductupto6kbcanbegenerated(Figure1).

      Figure1.FirstStrandDNASynthesisFigure 1. First Strand DNA Synthesis

      FirststrandcDNAsysthesiswascarriedoutinthepresenceof1XM-MuLVEnzymeMixat42°Cusing0.5μgofhumanspleentotalRNAinthepresenceofdT23VN(lanes1,4and7)orRandomHexamerMix(lanes2,5and8).No-RTcontrolswerelanes3,6and9.OneTaqHotStart1XMasterMixwasusedtoamplifya1.5kbfragmentofbeta-actingene,a0.6kbfragmentofGAPDHgene,anda5.5kbfragmentfromp532genein35cycles.TheMarkerlane(M)contains2-LogDNALadder(NEB#N3200).
      Figure2.FirstStrandDNASynthesisFigure 2. First Strand DNA Synthesis


      KitComponents

      Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:

      Storeat(°C)Concentration
      Oligod(T)23VN-2050μM
      Nuclease-freeWater-20
      M-MuLVEnzymeMix-2010X
      M-MuLVReactionMix-202X
      RandomPrimerMix-2060μM
      OneTaq®HotStart2XMasterMixwithStandardBuffer-202X
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