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產(chǎn)品介紹Human TGF-β1 ELISA Kit (Human Transforming Growth Factor-β1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人轉化生長因子β1 ELISA 試劑盒，可以定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 TGF-β1 濃度。轉化生長因子β是調節(jié)細胞生長和分化的 TGF-β超家族。這一家族除 TGF-β1 至 TGF-β5 外，還有活化素、抑制素、繆勒氏管抑制物質(MIS)和骨形成蛋白(BMPs)。一般在細胞分化活躍的組織常含有較高水平的 TGF-β，如成骨細胞、腎臟、骨髓和胎肝的造血細胞。TGF-β1 在人血小板和哺乳動物骨中含量最高。TGF-β1 以非活性狀態(tài)存在，激活時是 TGF-β1 活性部分釋放。TGF-β1 具有激活和抑制雙重功能，在體外，TGF-β1 的活化是對其酸化。許多 TGF-β1 受體調節(jié)其生物活性，有受體 I(53-65KD) ，受體 II (83-110KD)，受體 III (250-310KD)，受體 IV (60KD)，受體 V (400KD)。TGF-β是由兩個結構相同或相近的、分子量為 12.5 kDa 亞單位借二硫鍵連接成的二聚體。人 TGF-βcDNA 序列研究表明，單體的 TGF-β112 氨基酸殘基是由含 400 氨基酸殘基的前體分子從羧基端裂解而來。人 TGF-β1 基因定位于 19 染色體上，含有 7 個外顯子。人和小鼠 TGF-β1 的同源性高達99%，不同種屬中TGF-β都具有重要的生物學功能。TGF-β 的生物學功能主要在炎癥、組織修復和胚胎發(fā)育等方面，TGF-β對細胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調節(jié)作用。TGF-β可抑制免疫活性細胞的增殖；對細胞表型進行調節(jié)；抑制淋巴細胞的分化；抑制細胞因子產(chǎn)生；誘導或抑制原癌基因表達等。TGF-β在治療傷口愈合，促進軟骨和骨修復以及通過免疫抑制治療自身免疫性疾病和移植排斥等方面有潛在的應用前景。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中人 TGF-β1濃度。在人TGF-β1單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的TGF-β1會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗人TGF-β1抗體，抗人 TGF-β1抗體與結合在單抗上的人TGF-β1結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有TGF-β1，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍色；加終止液變?yōu)辄S色。在450 nm下測OD 值，人TGF-β1濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中人TGF-β1濃度。
UE-H6136S/H6136M/H6136L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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