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注：終止液和顯色劑具有腐蝕性，一旦接觸到液體，請盡快用大量清水沖洗。
產(chǎn)品介紹 Human TNF-α ELISA Kit (Human Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人腫瘤壞死因子α ELISA 試劑盒，可以定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 TNF-α濃度。TNF-α是一種主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的單核因子。人的 TNF-α約 2.76 kb，由 4 個外顯子和 3 個內(nèi)含子組成。人 TNF-α前體由 233 個氨基酸殘基組成，切除含 76 個氨基酸殘基的信號肽后，形成的成熟型 TNF-α為 157 個氨基酸殘基。人 TNF-α分子量為 17 kDa。在氨基酸水平上，人與鼠的 TNF-α有 79％同源性，TNF-α的生物學(xué)作用無明顯的種屬特異性。人類多種細(xì)胞均可表達 TNF-α，包括 B 細(xì)胞，結(jié)腸柱狀上皮細(xì)胞，NK 細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，單核細(xì)胞，肥大細(xì)胞，中性粒細(xì)胞等。TNF-α的生物學(xué)活性非常復(fù)雜，包括對造血、免疫和炎癥的調(diào)節(jié)；對血管和凝血的影響和對多種器官（肝、心臟、骨、軟骨、肌肉和其它組織）的作用。如殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞；提高中性粒細(xì)胞的吞噬能力，增加過氧化物陰離子產(chǎn)生，增強 ADCC 功能，刺激細(xì)胞脫顆粒和分泌髓過氧化物酶；抗感染；促進髓樣白血病細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化；促進細(xì)胞增殖和分化等。在臨床上，應(yīng)用 TNF 在治療腫瘤等方面開始臨床Ⅱ期試驗，也可與 IL-2 聯(lián)合治療腫瘤。TNF-α的抗腫瘤作用包括 TNF-α的直接作用和 TNF-α誘導(dǎo)的針對腫瘤的免疫應(yīng)答。TNF-α參與包括哮喘，Π型糖尿病，Crohn’s 病，和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。TNF 刺激內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥、組織損傷和凝血從而誘發(fā)感染性休克。TNF-α又稱惡液素，可誘發(fā)機體發(fā)生惡液質(zhì)。TNF 還具有類似 IFN 抗病毒作用，阻止病毒早期蛋白質(zhì)的合成，從而抑制病毒的復(fù)制，并與 IFN-α和 IFN-γ協(xié)同抗病毒作用。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中人TNF-α 濃度。在人TNF-α單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板中加入適度稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的TNF-α?xí)c其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗人TNF-α抗體，抗人TNF-α抗體與結(jié)合在單抗上的人TNF-α結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有TNF-α，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變?yōu)辄S色。在450 nm下測OD值，人TNF-α濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中人TNF-α濃度。
UE-H6137S/H6137M/H6137L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復(fù)實驗；檢查試劑配制方法；復(fù)核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍(lán)色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶。嚴(yán)格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標(biāo)準(zhǔn)曲線差？1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標(biāo)板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴(yán)格按照說明書操作流程。6.標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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