◆金牌胎牛血清取自胎齡多少的胎牛?4-5個(gè)月胎齡。◆金牌胎牛血清的胎牛檢測(cè)過那些病毒?BVDV、PI3、BAV-3、BPV、REO3、Rabies◆如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。注意融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。長(zhǎng)期保存推薦在-20℃以下,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍,并避免反復(fù)凍融。◆有時(shí)在血清中見到的絮狀沉淀可能是些什么物質(zhì)?主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,可用400 xg離心5 min去除,也可不用處理。◆如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。(2) 血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。(6) 若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。◆為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。◆細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過老,破碎的細(xì)胞殘骸;(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。◆細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。(3) 培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0- 7.2。(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。(5) 掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過老。