無論您使用哪種染料,四甲基羅丹明甲酯(TMRM)還是MitoTracker Red FM,未處理的細(xì)胞都會(huì)發(fā)出熒光。只要細(xì)胞線粒體膜電位降低就會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)降低,最重要的是變化的程度。當(dāng)線粒體膜電位發(fā)生改變時(shí),JC-1染料不僅強(qiáng)度改變,還有激發(fā)和發(fā)射比例光譜的改變。設(shè)置未處理的對(duì)照和用線粒體膜電位去穩(wěn)定劑(如CCCP或FCCP)處理的陽(yáng)性對(duì)照是非常重要的。這些染料僅用于活細(xì)胞,在固定處理的細(xì)胞中無法保留相同程度的信號(hào)。◆用PFA固定是否可行(現(xiàn)場(chǎng)成像后,用于儲(chǔ)存)?或者這會(huì)干擾染料信號(hào)嗎?如果您想保持JC-1染料和固定后檢測(cè)到的線粒體膜電位之間的關(guān)系,這是不可能的,這是因?yàn)镴C-1依賴于線粒體膜電位,而線粒體膜電位將被固定所消除。◆請(qǐng)問做JC-1培養(yǎng)板該如何選擇?比如用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度的話是否一定需要在避光培養(yǎng)板中做?普通的透明板可以嗎?如果用熒光顯微鏡觀察拍照的話又應(yīng)該用什么板呢?熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)的話要選用黑色的酶標(biāo)板,熒光顯微鏡拍照的話可以用透明的板子◆請(qǐng)問,對(duì)于從動(dòng)物組織中用線粒體提取試劑盒提取出來的線粒體,用CCCP設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組時(shí),應(yīng)該用什么濃度處理多長(zhǎng)時(shí)間,不同組織中提純出來的線粒體,處理方式是否不同?純化的線粒體不適合用于CCCP做陽(yáng)性對(duì)照◆可以用來組織切片染色嗎,如果可以需要注意什么呢?適用于組織的流式檢測(cè)嗎?需要新鮮組織,先提取純化線粒體再檢測(cè),可能不太適合做流式◆請(qǐng)問CCCP對(duì)細(xì)胞膜電位的抑制作用可以有多長(zhǎng),我想測(cè)試長(zhǎng)時(shí)間的48h?之后再染JC-1,有什么建議嗎?對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10μM CCCP處理20分鐘后線粒體的膜電位會(huì)完全喪失,JC-1染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料確定◆你好,請(qǐng)問染完色后,用抗淬滅劑封片后免疫熒光顯微鏡觀察,鏡下觀察細(xì)胞會(huì)移動(dòng),拍出來的照片是模糊的,請(qǐng)問出現(xiàn)這種情況一般考慮什么問題?怎么解決呢?可能是細(xì)胞沒固定的原因,一般可以在孔板里染色后直接用倒置顯微鏡在孔板里觀察,不用封片◆請(qǐng)問用純化的線粒體比直接用細(xì)胞測(cè)流式有什么優(yōu)勢(shì)嗎?是孵育的時(shí)間比較短嗎?直接用細(xì)胞做的,趨勢(shì)不明顯,如果提取線粒體后去測(cè)會(huì)不會(huì)得到更明顯的結(jié)果?提取的純化線粒體是細(xì)胞器一般建議用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)相應(yīng)的紅綠熒光值,純化的線粒體染色更好染一些,相對(duì)于細(xì)胞來說可能會(huì)更好檢測(cè)一些
使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn):參考文獻(xiàn)1.Mitochondrial membrane potential and nuclear changes in apoptosis caused by serum and nerve growth factor withdrawal: time course and modification by (-)-deprenyl應(yīng)用方向:熒光相對(duì)比率2.Hsp60 regulation of tumor cell apoptosis應(yīng)用方向:細(xì)胞流式3.Quantum dot-induced cell death involves Fas upregulation and lipid peroxidation in human neuroblastoma cells應(yīng)用方向:細(xì)胞成像