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NEB/Vaccinia Capping System/M2080S/400 units

價格: ￥1620.00 市場價: 2700.00

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貨號: M2080S-400units

品牌: NEB

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- Description:
  BasedontheVacciniavirusCappingEnzyme(VCE),theVacciniaCappingSystemprovidesthe?necessarycomponentstoadd7-methylguanylatecapstructures(Cap0)tothe5′endofRNA(1).Ineukaryotes,theseterminalcapstructuresareinvolvedinstABIlization(2),transport(3),andtranslation(4)ofmRNAs.EnzymaticproductionofcappedRNAisaneasywaytoimprovethestabilityandtranslationalcompetenceofRNAusedforin?vitrotranslation,transfection,andmicroinjection.Alternatively,useoflabeledGTPinareactionprovidesaconvenientwaytolabelanyRNAcontaininga5′terminaltriphosphate.
  
  Thissingleenzymeiscomposedoftwosubunits(D1andD12)andhasthreeenzymaticactivities(RNAtriphosphataseandguanylyltransferasebytheD1subunitandguaninemethyltransferasebytheD12subunit);allnecessaryforadditionofacompleteCap0structure,m7Gppp5′N(5,6).Invitrotranscriptscanbecappedinlessthanonehourinthepresenceofthecappingenzyme,reactionbuffer,GTP,andthemethyldonor,SAM.Cappingisnearly100%efficientandallcappedstructuresareaddedintheproperorientation,unlikeco-transcriptionaladditionofsomecapanalogs(7).
  ProductSource
  An?E.coli?strainthatcarriesthegenesfortheVaccinia(WR)cappingenzyme.
  ReagentsSupplied
  Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
  Storeat(°C) Concentration
  CappingBuffer 10X
  S-adenosylmethionine(SAM) -20 32mM
  GTP -20 10mM
  Notes:
  (readpriortosettingupreaction)RNAusedforcappingreactionsshouldbepurifiedpriortouseandsUSPendedinnuclease-freewater.EDTAshouldnotbepresentandthesolutionshouldbefreeofsalts.WhileRNaseInhibitorisnotrequired,manyusersprefertouseittoenhancethestabilityoftheirRNAinsolution.Ifthisisdesired,0.5μlofastandardRNaseinhibitorprep(suchasRNaseInhibitor,Murine,NEB#M0314)canbeaddedatthetimeofreactionset-up.TheadditionalvolumecanbesubtractedfromtheamountofH2Ousedinstep1ofboththecappingandthelabelingprotocols.HeatingthesolutionofRNApriortoincubationwiththeVacciniaCappingEnzymeremovessecondarystructureonthe5′endofthetranscript.Extendtimeto10minutesfortranscriptswithknownhighlystructured5′ends.SAMisunstableatpH7–8,37°Candshouldbemixedfreshpriortostartingthereaction.Werecommenddetermininghowmanyreactionswillbeperformedanddilutinganaliquotofthe32mMstockto2mMjustpriortosettingupthereactions.This"workingstock"shouldbekeptonicetopreventdegradationofSAM.Fortranscriptswithknownstructured5′ends,thereactiontimecanbeextendedto60minutestoimprovecappingefficiency.Forlabelingthe5′end,thetotalGTPconcentrationshouldbearound1–3XthemolarconcentrationofmRNAinthereaction.The10mMstockcanbedilutedanda"spike"ofhotGTPaddedtomaketheGTPmix.
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