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產(chǎn)品介紹 Mouse IL-1β ELISA Kit (Mouse Interleukin-17A Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠白細(xì)胞介素 1β ELISA 試劑盒，可以定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 IL-1β 濃度。 IL-1 分為 IL-1α、IL-1β兩種，人和小鼠 IL-1 基因定位于 2 號染色體，均含 7 個外顯子。IL-1 前體(ProIL-1)為 31 kDa，通過蛋白水解酶裂解形成成熟的 IL-1 分子。IL-1 在不同種屬中有較高同源性。在氨基酸水平上，IL-1α和 IL-1β在不同種屬同源性分別為 60％-70％和 75％-78％；但在同一種屬中 IL-1α與 IL-1β同源性只有 25％。IL-1α和 IL-1β分子量約 17.5 kDa，等電點(diǎn)分別為 5 和 7，同源性為 28％。IL-1 主要是通過與其受體 (IL-1R) 結(jié)合形成 IL-1 受體復(fù)合物發(fā)揮生物學(xué)作用。T 細(xì)胞、成纖維細(xì)胞表面 IL-1R 為 80 kDa，而 B 細(xì)胞則為 68 kDa，分別稱為 IL-1 RI (CDw 121 a)和 IL-1 RⅡ(CDw 121 b)。IL-1 受體復(fù)合物至少由 IL-1α或 IL-1β，Ⅰ型 IL-1 受體(IL-1RⅠ)，IL-1R 輔助蛋白(IL-1 RAcP)三部分組成。這一復(fù)合物介導(dǎo)了 IL-1 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。IL-1α和 IL-1β是 IL-1 受體激動性配基。IL-1 RAcP 是分子量約為 66 kDa 的多肽。細(xì)胞表面單獨(dú)存在的 IL-1RⅠ與配體結(jié)合后仍然是不活躍的，只有 IL-1 RAcP 結(jié)合上去后，才能從不活躍狀態(tài)轉(zhuǎn)變成有激活功能的 IL-1 受體復(fù)合物。IL-1 與 IL-1 RtⅡ結(jié)合后易發(fā)生降解，因此被認(rèn)為是下調(diào)受體。在某些白血病患者血清和尿中以及單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中發(fā)現(xiàn)一種多肽性質(zhì)的 IL-1 特異性抑制因子，稱為 IL-1 受體拮抗物(interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra)， IL-1ra 能特異性地抑制 T 細(xì)胞表面 IL-1R 與 IL-1 結(jié)合。IL-1ra 不與 IL-1 直接結(jié)合，而是一種 IL-1 與 IL-1R 相互結(jié)合的競爭性抑制物。IL-1ra 與 IL-1RI 結(jié)合的親和力要高于與 IL-1RⅡ結(jié)合的親和力。IL-1ra、IL-1α、IL-1β與 IL-1RI 結(jié)合的親和力比較相近，但 IL-1ra、IL-1α與 IL-1 RⅡ結(jié)合的親和力要低于 IL-1β 與 IL-1RⅡ結(jié)合的親和力。IL-1β主要由血液中的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，星形細(xì)胞，少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞，NK 細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，角質(zhì)形成細(xì)胞，巨核細(xì)胞，血小板，神經(jīng)元，中性粒細(xì)胞，成骨細(xì)胞，許旺細(xì)胞，滋養(yǎng)層細(xì)胞，T 細(xì)胞和成纖維細(xì)胞也可產(chǎn)生 IL-1β 。IL-1 具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用，并有致熱和介導(dǎo)炎癥的作用。 本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法檢測樣品中小鼠 IL-1β 濃度。在小鼠 IL-1β 單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板中加入適度稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的 IL-1β 會與其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗小鼠 IL-1β 抗體，抗小鼠 IL-1β 抗體與結(jié)合在單抗上的小鼠 IL-1β 結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有 IL-1β ，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變?yōu)辄S色。在 450 nm 下測 OD 值，小鼠 IL-1β 濃度與 OD 450 值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中小鼠 IL-1β 濃度。
UE-M6145S/M6145M/M6145L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復(fù)實驗；檢查試劑配制方法；復(fù)核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍(lán)色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶。嚴(yán)格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標(biāo)準(zhǔn)曲線差？1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標(biāo)板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴(yán)格按照說明書操作流程。6.標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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