◆實驗過程中沒有純化步驟,我如何將未標(biāo)記上的熒光染料除去?該問題描述了我們研發(fā)的關(guān)鍵因素,我們獨特的染料、緩沖液組分以及完善的標(biāo)記策略已經(jīng)完美地解決了這個問題,具體機(jī)制涉及專利保護(hù),不便透露。◆Super-n-stain? 試劑盒可用于多色免疫標(biāo)記嗎,不同抗體間是否會發(fā)生染料轉(zhuǎn)移?Super-n-stain? 試劑盒抗體與染料是共價結(jié)合方式,不存在染料擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。詳細(xì)信息請參照上面產(chǎn)品說明部分。◆Super-n-stain? 試劑盒可用于標(biāo)記抗體以外的蛋白嗎?該試劑盒是針對 IgG 抗體標(biāo)記優(yōu)化設(shè)計的,不推薦用于標(biāo)記其它蛋白。Super-n-stain? 標(biāo)記條件可能會導(dǎo)致 IgM 變性。◆Super-n-stain? 試劑盒標(biāo)記一抗和二抗的靈敏性是否一樣?直接免疫熒光檢測信號會弱于間接檢測,詳細(xì)信息請參照上面產(chǎn)品說明部分。◆用標(biāo)記二抗的間接標(biāo)記相比,直接標(biāo)記復(fù)合物有哪些優(yōu)勢?直接免疫染色避免了二抗孵育和清洗的步驟,容許來自同一物種的多個抗體同時使用進(jìn)行多色檢測,可以使用來自同一物種的抗體進(jìn)行動物組織染色,從而避免了二抗的交叉反應(yīng)。◆Super-n-stain? 試劑盒與 Invitrogen’s Zenon 抗體標(biāo)記試劑盒相比,有哪些優(yōu)勢?主要優(yōu)勢: 1. YF 染料與抗體共價結(jié)合避免了多重染色時染料轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散現(xiàn)象; 2. Super-n-stain? 復(fù)合物在儲液中可穩(wěn)定保存幾個月之久,而 Zenon 標(biāo)記物必須在 30min 內(nèi)使用; 3. Super-n-stain? 復(fù)合物體積更小些,因為染料直接與抗體結(jié)合,而 Zenon 復(fù)合物與抗體片段配合使用; 4. 無需進(jìn)行 YF 染料與標(biāo)記蛋白的比例優(yōu)化,直接混合、染色即可; 5. 無需進(jìn)行后染固定; 6.沒有種屬特異性◆Super-n-stain? 試劑盒與 Innova Bioscience Lightning-link 快速抗體標(biāo)記試劑盒相比,有哪些優(yōu)勢?
Super-n-stain? 試劑盒使用熒光更亮、光穩(wěn)定性更好的 YF 染料,試劑盒規(guī)格更靈活,可提供至單個抗體標(biāo)記反應(yīng)。
◆什么是 YF 染料?
YF 染料是一種水溶性較好、用于標(biāo)記蛋白和核酸的小分子有機(jī)染料。我們可提供多達(dá) 20 種的此類 YF 染料。◆我應(yīng)如何選擇 Super-n-stain? 試劑盒?
每種 YF 染料,我們都提供三種不同抗體標(biāo)記量的試劑盒,分別是:5-20 μg, 20-50 μg, 50-100 μg。對于沒有穩(wěn)定劑的抗體標(biāo)記,根據(jù)抗體規(guī)格,選擇其中一種即可,含有穩(wěn)定劑的抗體標(biāo)記,請參考產(chǎn)品描述中的表 1。◆若待標(biāo)記抗體總量適用于兩種 Super-n-stain? 試劑盒,我應(yīng)如何選擇?
例如:標(biāo)記 50 μg 抗體,我應(yīng)購買 50-100 μg 抗體標(biāo)記試劑盒還是 20-50μg 的試劑盒?
遇到這種情況,兩種規(guī)格都可以得到較好的結(jié)果,使用較小規(guī)格的效果更好。
◆如何選擇染料與蛋白的比例獲得較好的標(biāo)記效果?
如果待標(biāo)記的抗體量在試劑盒范圍內(nèi),無需改變?nèi)玖狭炕蚍磻?yīng)時間,因為 Super-n-stain? 試劑盒中染料和反應(yīng)緩沖液可以確保較好的標(biāo)記效果。◆我可以拆分試劑盒組分,以便多次使用嗎?不行,因為 Super-n-stain? 試劑盒已經(jīng)優(yōu)化至一個標(biāo)記單位,我們不建議拆分試劑盒以標(biāo)記多個抗體或多次使用。◆抗體濃度是否影響標(biāo)記效率?Super-n-stain? 試劑盒較好的標(biāo)記抗體濃度為 0.5-1 mg/mL,您可通過濃縮或稀釋使待標(biāo)記抗體達(dá)到上述濃度范圍,小于或超過該濃度范圍,會導(dǎo)致標(biāo)記效率過低或過多。◆使用標(biāo)記后的抗體進(jìn)行免疫熒光染色未觀察到熒光信號?與供應(yīng)商聯(lián)系,確??贵w組分、濃度在容許范圍內(nèi)。◆使用標(biāo)記后的抗體進(jìn)行免疫熒光染色未觀察到熒光信號怎么辦?
與供應(yīng)商聯(lián)系,確??贵w組分、濃度在容許范圍內(nèi)。在直接標(biāo)記前,應(yīng)確定用于間接標(biāo)記的一抗的敏感性和特異性。為了得到與間接標(biāo)記相同的信號強(qiáng)度,直接標(biāo)記時需要使用更高濃度的一抗,更多信息請參考產(chǎn)品應(yīng)用部分。共價標(biāo)記可能會影響某些抗體的反應(yīng)活性??梢酝ㄟ^實驗確定是否是這一因素的原因,即使用 Super-n-stain? 標(biāo)記的一抗和熒光標(biāo)記的二抗進(jìn)行間接免疫染色,以確定 Super-n-stain? 標(biāo)記后的一抗是否仍具有反應(yīng)活性。如果有兼容 YF 染料的激發(fā)/發(fā)射波長的熒光讀膠儀或掃描儀,可以通過 SDS-PAGE 電泳確定抗體是否標(biāo)記上染料,取 0.1-0.5 μg 標(biāo)記抗體進(jìn)行變性 SDS-PAGE電泳,然后進(jìn)行凝膠拍照,你應(yīng)該可以觀察到 IgG 的 55 kDa 的重鏈和 25 kDa 的輕鏈對應(yīng)的兩條熒光條帶。