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螞蟻淘/YF<sup>?</sup>555 TUNEL 細胞凋亡試劑盒（橙紅色熒光）/20T/T6039S
  • 螞蟻淘/YF<sup>?</sup>555 TUNEL 細胞凋亡試劑盒（橙紅色熒光）/20T/T6039S

螞蟻淘/YF?555 TUNEL 細胞凋亡試劑盒（橙紅色熒光）/20T/T6039S

價格: ￥1105.00 市場價: 1841.67
貨號: T6039S
品牌: ebiomall
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      產(chǎn)品內(nèi)容

      產(chǎn)品貨號

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      T6013S

      YF?488 TUNEL細胞凋亡試劑盒（綠色熒光）

      20T

      T6013L

      50T

      T6039S

      YF?555 TUNEL細胞凋亡試劑盒（橙紅色熒光）

      20T

      T6039L

      50T

      T6014S

      YF?594 TUNEL細胞凋亡試劑盒（紅色熒光）

      20T

      T6014L

      50T

      T6063S

      YF?640 TUNEL細胞凋亡試劑盒（遠紅熒光）

      20T

      T6063L

      50T

      T6067S

      Cy3 TUNEL細胞凋亡試劑盒

      20T

      T6067L

      50T

      組分
      規(guī)格

      20T

      50T

      A. TUNEL Equilibration Buffer

      2×1 mL

      5 mL

      B. YF?488/555/594/640/Cy3 TUNEL Reaction Buffer

      1 mL

      2 × 1.25 mL

      C. TdT Enzyme

      20 μL

      50 μL

      D. Proteinase K (2 mg/mL)

      40 μL

      100 μL

      E. DNase I (2 U/μL)

      5 μL

      13 μL

      F. 10 × DNase I Buffer

      100 μL

      260 μL

      儲存條件本產(chǎn)品應(yīng)置于-20℃儲存，組分B需避光，避免反復(fù)凍融。有效期見外包裝。注：組分A和B使用時請佩戴口罩、手套，接觸皮膚，請立即用大量水沖洗。產(chǎn)品介紹細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體DNA的降解，這種降解非常特異并有規(guī)律，所產(chǎn)生的不同長度的DNA片段為180 bp-200 bp的整數(shù)倍，表現(xiàn)為瓊脂糖凝膠電泳中呈現(xiàn)特異的梯狀Ladder圖譜。本試劑盒采用TUNEL法，應(yīng)用末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）在凋亡細胞中斷裂DNA的3′-OH末端催化摻入YF?/Cy-dUTP，YF?/Cy-dUTP標記的DNA可以用熒光顯微鏡直接觀察或者用流式細胞儀定量。TUNEL法可以選擇性的檢測凋亡細胞，而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成的DNA鏈斷裂的細胞。標記的dUTP（如地高辛-dUTP、生物素-dUTP），可以直接進行原位檢測，是一種更快速、直接的檢測手段。注意事項1. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

      說明書：UE-T6039S/T6039L
      MSDS：MSDS T6039 YF?555 TUNEL Apoptosis Kit（Orange red fluorescence ）
      常見問題解答：◆為什么出現(xiàn)了一些非特異標記？

      1. 有些細胞或組織，比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平較高，使得DNA全部被切斷，易導(dǎo)致假陽性。建議：取出細胞或組織后要立即固定并充分固定，以阻止這些酶的活性，同時設(shè)置陰性對照。2. 內(nèi)源性過氧化物酶影響，建議：對于肝臟、腎臟等血細胞含量多的組織，適當延長封閉時間和升高過氧化氫的濃度。3. 固定液濃度過高或過低，導(dǎo)致組織中心部分固定效果不佳，而使得中心部細胞自溶、DNA鏈出現(xiàn)不規(guī)則斷裂，產(chǎn)生假陽性。建議：推薦使用4%多聚甲醛。4. TdT 酶反應(yīng)時間過長或Tunel反應(yīng)過程中反應(yīng)液發(fā)生蒸發(fā)或滲漏，細胞或組織表面不能保持濕潤。注意控制反應(yīng)時間，并確保TdT 酶反應(yīng)液能很好地覆蓋樣品。5. 石蠟、脂肪、血液、體液等都較易與染料結(jié)合，所以組織切片制作時要保持干凈、脫蠟要徹底。6. 有些試劑或細胞存在自發(fā)熒光，選擇染料時要避開自發(fā)熒光的顏色。◆為什么沒有染上熒光？1. 固定不充分。固定液首選4%多聚甲醛，現(xiàn)用現(xiàn)配。不建議使用乙醇，乙醇固定液對組織的滲透力較弱，影響TUNEL標記效率.2. 細胞膜和核膜的通透不充分，TdT酶未能到達核內(nèi)。細胞與冰凍切片，可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min，石蠟切片推薦使用蛋白酶K，37℃通透30 min；不同的細胞和組織所需要的通透時間略有不同，時間太長容易脫片，適當調(diào)整。3. 延長標記時間至2h，并適當增加TdT酶及dUTP的用量。4. 確定實驗對象細胞有凋亡。準備一份DNase I處理的陽性對照，驗證TdT酶反應(yīng)是否正確進行。◆如何對細胞核進行復(fù)染？可在TUNEL反應(yīng)結(jié)束后對細胞核進行染色。◆為什么熒光背景高？1. 支原體污染：可以使用支原體染色檢測試劑盒驗證。2. TdT 酶反應(yīng)時間過長，可以用試劑盒提供的TdT酶稀釋液將TdT酶稀釋2-5倍后再按照說明書操作，稀釋后的TdT酶僅供當日使用。3. 處于高速分裂和增殖狀態(tài)中的細胞，有時也會出現(xiàn)細胞核中的DNA 斷裂。建議：在非高增殖期取樣檢測；4. 有些試劑或細胞存在自發(fā)熒光，選擇染料時要避開自發(fā)熒光的顏色。5. DAB 孵育時間過長，減少DAB 染色時間。6. Biotin-X-dUTP 的非特異性結(jié)合，在TdT 酶反應(yīng)之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。◆標記率低？1. 乙醇、甲醇或甲醛（市面上購買的甲醛大多含有甲醇）固定的樣品標記效率較低（因為在固定時染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失），采用推薦的固定液。2. 固定時間過長，導(dǎo)致交聯(lián)程度過高，減少固定時間。3. 貼壁細胞如果使用藥物誘導(dǎo)凋亡，會細胞皺縮，貼壁黏附力降低，導(dǎo)致凋亡細胞容易脫落。建議：在凋亡誘導(dǎo)結(jié)束后，可以對多孔板進行1000g離心5min，然后再吸出培養(yǎng)基并用PBS洗滌。如果沒有適合的離心機，請注意操作輕緩，防止發(fā)生凋亡的細胞在洗滌時被洗去。后續(xù)整個操作也需要輕緩。◆在蛋白酶K中消化組織樣品多久？大部分組織樣品需要充分消化15分鐘。最佳的培養(yǎng)時間根據(jù)組織類型和厚度而不同。腦組織比其他組織需要更長的蛋白酶處理時間。◆實驗的組織切片應(yīng)該多厚？老鼠腸、腎臟、肝臟、心臟和結(jié)腸厚度5–20 μm。
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